期刊简介
1980年创刊，中华医学会、徐州医学院主办。本刊前身是《国外医学?麻醉学与复苏分册》，以提高为宗旨，竭诚为我国麻醉学科学术水平的提高和人才建设起到推动和导向作用。期刊内容涵盖临床麻醉、重症监测治疗、生命复苏、疼痛诊疗、药物依赖与戒断等领域。本刊以综述为特色，以创新性研究成果为核心，以临床前瞻性研究、应用基础和基础研究为重点。设置有论著、综述、述评、病例析评、学科建设等栏目。目前已被列为中国科技论文统计源期刊及中国学术期刊综合评价数据库来源期刊，已被《中国学术期刊》光盘版、《中国期刊全文数据库》、万方数据库、美国化学文摘全文收录。
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首页>国际麻醉学与复苏杂志
- 杂志名称：国际麻醉学与复苏杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生和计划生育委员会
- 主办单位：中华医学会,徐州医学院
- 国际刊号：1673-4378
- 国内刊号：32-1761/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 维普收录(中)
基于多肽阵列技术构建穿膜肽靶向抑制Fyn与突触后致密物蛋白95相互作用的实验研究
杨秀环；马彤彤；李舒愉；贾济；彭捷；陆建华；屠伟峰
关键词：蛋白转导结构域, N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基, 多肽阵列, 结合基序
摘要：目的 探讨基于多肽阵列技术合成的穿膜肽离体条件下抑制非受体酪氨酸激酶Fyn与突触后致密物蛋白(postsynaptic density protein,PSD)95相互作用,进而抑制含N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(N-methyl D-aspartate receptor subtype 2B,NR2B)的N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl D-aspartate receptor,NMDAR)过度磷酸化,减轻慢性疼痛的可行性.方法 ①通过多肽阵列技术的ovedapping平台确定Fyn的SH2结构域与PSD95的PDZ3结构域相互作用的结合基序,合成含此结合基序的短肽FynP,并与人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)-Tat蛋白转导结构域连接形成可进入细胞的穿膜肽FynP-Tat,同时合成乱序穿膜肽mFynP-Tat.②原代培养SD大鼠胎鼠脊髓背角神经元,通过免疫荧光检测不同浓度组(10、20、30 μmol/L)多肽内化细胞的效率.③用CCK8法检测不同浓度(10、20、100μmol/L)穿膜肽分别孵育神经细胞(6、24、48 h)的细胞毒性.④将神经细胞分为穿膜肽组(FynP-Tat组)、乱序穿膜肽组(mFynP-Tat组)和PBS组(对照组)进行孵育,用谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST) pull-down和Western blot验证抑制Fyn与PSD95相互作用的效率. 结果 ①通过overlapping确定Fyn与PSD95相互作用的结合基序为KGAYSL.②与FynP-Tat 10 μmol/L组[(77.3±1.4)％]比较,FynP-Tat 20 μmol/L组[(91.5±2.0)％]和FynP-Tat 30 μmol/L组[(93.4:2.2)％]的内化效率较高,差异有统计学意义(P＜0.05);与mFynP-Tat 10μmol/L组[(75.0±3.6)％]比较,mFynP-Tat 20 μmol/L组[(91.4±1.3)％]和mFynP-Tat 30 μmol/L组[(92.7±2.1)％]的内化效率较高,差异有统计学意义(P＜0.05);③与FynP-Tat(100 μmol/L,6h)组[(82.5±3.0)％]比较,FynP-Tat(100 μmol/L,24 h)组和FynP-Tat(100 μmol/L,48 h)组细胞活力[(75.1±1.5)％和(68.5±1.2)％]降低(P＜0.05);与mFynP-Tat(100 μmol/L,6h)组[(83.3±2.0)％]比较,mFynP-Tat(100 μ mol/L,24 h)组和mFynP-Tat(100 μmol/L,48 h)组细胞活力[(75.6±2.9)％和(68.1±0.7)％]降低(P＜0.05);④与mFynP-Tat组、PBS组比较结果显示,FynP-Tat能够抑制PSD95结合到GST-Fyn融合蛋白上(P＜0.05),但不会抑制PSD95结合到GST-NR2B融合蛋白上(P＞0.05). 结论 离体条件下,基于多肽阵列技术合成的穿膜肽FynP-Tat能够进入神经细胞,细胞毒性低,可有效抑制Fyn与PSD95的相互作用.
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